Forno de Hibridização com Agitação — Shaker

O LITSEN dispõe de um forno de hibridização com agitação (Hybridization Oven/Shaker), fabricado pela Amersham Pharmacia Biotech, equipamento destinado à incubação de amostras em temperatura controlada com movimento rotativo contínuo. O equipamento é classicamente empregado em protocolos de biologia molecular, especialmente na hibridização de ácidos nucleicos imobilizados em membranas de suporte sólido, e amplia a capacidade do laboratório para ensaios de caracterização e avaliação de atividade biológica de compostos e biomateriais de interesse.A tecnologia baseia-se na combinação de um forno de incubação com aquecimento por circulação de ar e controle microprocessado de temperatura, com um sistema rotativo tipo rotisserie que acomoda frascos de hibridização de vidro, promovendo agitação contínua e uniforme durante toda a incubação. Na técnica de hibridização, o DNA ou o RNA é imobilizado em membrana de nitrocelulose ou nylon e incubado com uma sonda específica marcada, de modo que o movimento rotatório assegura o contato homogêneo da solução de sondas com a superfície da membrana e a uniformidade da temperatura, condições essenciais para a especificidade e a reprodutibilidade da reação. Na linha original da Amersham Biosciences, o equipamento opera com temperatura de trabalho até cerca de 80 °C, acomoda sete frascos de vidro com 40 mm de diâmetro externo e oferece rotação variável até aproximadamente 10 rpm, valores que devem ser confirmados para a unidade específica do laboratório.

1. Aplicações principais

• Hibridização de ácidos nucleicos em membranas, incluindo Southern blot (DNA) e Northern blot (RNA);
• Hibridização por dot blot e slot blot;
• Hibridização in situ de sondas marcadas em preparações biológicas;
• Imobilização de DNA e RNA em membranas de nitrocelulose ou nylon;
• Incubação de membranas com sondas marcadas (radioativas ou enzimáticas) em temperatura controlada;
• Incubação de membranas com anticorpos em protocolos de Western blot;
• Etapas de lavagem de membranas em temperaturas controladas;
• Incubações de amostras em frascos rotativos que requerem temperatura constante e agitação suave;
• Apoio a ensaios de caracterização e avaliação biológica de extratos, compostos bioativos e biomateriais desenvolvidos no laboratório.

2. Informações do equipamento

Observações

Os valores não incluem consumíveis (frascos de hibridização, membranas, sondas, anticorpos, reagentes) nem o preparo de amostras ou o desenvolvimento metodológico. A viabilidade do uso dependerá do tipo de ensaio, da temperatura e do tempo de incubação, do número de membranas ou frascos e da necessidade de agitação durante o procedimento. Recomenda-se que o usuário informe previamente o tipo de ensaio pretendido (hibridização de ácidos nucleicos, Western blot ou incubação controlada), a temperatura e o tempo de incubação, o número de amostras e as condições de agitação desejadas, de modo a orientar o planejamento da utilização do equipamento.